■ 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Carrier DNA (又名鮭魚精DNA) 為短的線形單鏈DNA，可包裹質(zhì)粒DNA，在酵母細(xì)胞攝取外源質(zhì)粒DNA過程中發(fā)揮作用，促進(jìn)質(zhì)粒進(jìn)入酵母細(xì)胞，另外還可保護(hù)質(zhì)粒免于被DNA酶降解。在每次使用前務(wù)必進(jìn)行兩次熱變性，保證Carrier DNA在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)體系中以單鏈形式存在。Carrier DNA是酵母感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化所必需的配套試劑，每個(gè)轉(zhuǎn)化反應(yīng)需要10μl Carrier DNA。
■ 操作方法
1.Carrier DNA在每次使用前要通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，步驟如下：Carrier DNA放95℃水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min，再次放95℃水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min以上。
2.取100μl冰上融化的酵母感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5μg，Carrier DNA 10μl，PEG/LiAc（酵母轉(zhuǎn)化試劑ZC1600）500μl并吸打幾次混勻，30℃水浴30min (15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3.將管放42℃水浴15min (7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
4.5000rpm離心 40s棄上清，ddH2O 400μl 重懸，離心 30s棄上清。
5.ddH2O 50μl重懸，涂板，29℃培養(yǎng)48-96h。
■ 注意事項(xiàng)
1.在每次使用前務(wù)必進(jìn)行兩次熱變性，保證Carrier DNA在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)體系中以單鏈形式存在。
2.Carrier DNA 可在4℃短時(shí)間保存，如需長(zhǎng)時(shí)間保存請(qǐng)放-20℃。
