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基因組DNA提取原理及常見(jiàn)問(wèn)題分析

發(fā)布者:莊盟生物發(fā)布時(shí)間:2015-04-09瀏覽次數(shù):18881次

基因組,Genome,一般的定義是單倍體細(xì)胞中的全套染色體為一個(gè)基因組,或是單倍體細(xì)胞中的全部基因?yàn)橐粋€(gè)基因組。現(xiàn)代遺傳學(xué)家認(rèn)為,基因是DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳效應(yīng)的特定核苷酸序列的總稱(chēng),是具有遺傳效應(yīng)的DNA分子片段?;蛭挥谌旧w上,并在染色體上呈線性排列?;虿粌H可以通過(guò)復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代,還可以使遺傳信息得到表達(dá)。不同人種之間頭發(fā)、膚色、眼睛、鼻子等不同,是基因差異所致。

利用基因,人們可以改良果蔬品種,提高農(nóng)作物的品質(zhì),更多的轉(zhuǎn)基因植物和動(dòng)物、食品將問(wèn)世,人類(lèi)可能在新世紀(jì)里培育出超級(jí)物作。通過(guò)控制人體的生化特性,人類(lèi)將能夠恢復(fù)或修復(fù)人體細(xì)胞和器官的功能,甚至改變?nèi)祟?lèi)的進(jìn)化過(guò)程。

本公司根據(jù)不同樣品來(lái)源(如:細(xì)菌、酵母、血液、動(dòng)物組織、動(dòng)物細(xì)胞、植物組織、植物細(xì)胞等),制作了多種提取得率高,純度好,簡(jiǎn)單方便的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)

整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程不需要昂貴儀器,不需使用酚氯仿等有毒試劑,能夠得到高純度的大片段基因組DNA,操作簡(jiǎn)單,可同時(shí)處理多個(gè)樣品。

提取得到的基因組DNA可用于各種方向的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如:文庫(kù)構(gòu)建、基因圖譜、Sunthern-Blotting、PCR等。

使用樣品

細(xì)菌、酵母、血液、動(dòng)物組織、動(dòng)物細(xì)胞、植物組織、植物細(xì)胞等,最好使用新鮮樣品,或取樣后迅速將樣品密封,放于-20℃或-70℃保存,注意避免多次凍融樣品,否則將會(huì)導(dǎo)致所得基因組DNA的片段變小且提取質(zhì)量下降。

基因組DNA提取過(guò)程中注意事項(xiàng):

1、因?yàn)镈NA的一級(jí)結(jié)構(gòu)是分子生物研究的基礎(chǔ),所以應(yīng)盡量保證DNA的完整性。

2、盡量去除多余雜質(zhì),如:蛋白、脂類(lèi)、多糖、有機(jī)溶劑等的污染,以確保下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

樣品的預(yù)處理方式

植物材料:液氮研磨

動(dòng)物材料:勻漿、液氮研磨

細(xì)菌:溶菌酶破壁

酵母:破壁酶,玻璃珠研磨

基因組提取常見(jiàn)問(wèn)題

◆ 洗滌后硅膠膜上仍有雜質(zhì)殘留:

   細(xì)胞裂解不充分, 裂解液和樣品要快速充分混勻。

◆ 柱子堵塞:

   1.裂解或勻漿處理不徹底。減少樣品使用量,增加裂解液用量,增加勻漿和裂解時(shí)間。

   2.處理樣品太多。                              

◆ 洗脫產(chǎn)物DNA量很少或沒(méi)有:

   1.樣品中細(xì)胞或病毒濃度低。

   2.裂解液和樣品混合不均勻造成的細(xì)胞裂解不充分。  

   3.蛋白酶K活性下降造成的細(xì)胞裂解不充分。      

   4.溫浴時(shí)間不夠造成的細(xì)胞裂解不充分或蛋白降解不完全,盡量把組織切成小塊,延長(zhǎng)溫浴時(shí)間,使裂解物中沒(méi)有顆粒狀物質(zhì)殘留。

   5.在上柱前,裂解物中沒(méi)加乙醇,或用低濃度乙醇代替無(wú)水乙醇。

   6.DNA沒(méi)有有效洗脫。提高洗脫效率,可將離心吸附柱加入洗脫液后在室溫靜置至少1 min,再離心。

   7.洗脫液pH不合適,低pH值會(huì)減少DNA產(chǎn)率。確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間。

   8.洗脫體積太大,超過(guò)200μl洗脫體積所得的DNA濃度會(huì)降低,但DNA總量不會(huì)減少。

◆ A260/A280 比值較低:

   用水作為洗脫液時(shí),比值偏低。

◆ A260/A280 比值較高:

   大量RNA殘留,沒(méi)有使用RNase A,或RNase A活性下降。

◆ DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn):

   1.在洗脫液中有殘留的漂洗液W1,可通過(guò)再次離心去除硅膠膜上的W1。

   2.大量RNA殘留。

◆ 緩沖液A、B中有白色沉淀:  

   白色沉淀可能由于低溫或長(zhǎng)時(shí)間放置產(chǎn)生,可在使用前在56℃重新加熱溶解。

◆ 操作中加入緩沖液B有白色沉淀:

   緩沖液B加入后產(chǎn)生的白色沉淀在70℃溫浴時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響下游操作。


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