■ 基本信息
細(xì)胞名稱: | Hacat人永生化表皮細(xì)胞 |
背景資料: | 該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。 |
細(xì)胞來源: | DSMZ |
代次: | P3 |
STR鑒定: | 已通過 |
規(guī)格: | ①1ml凍存 ②T25復(fù)蘇 |
細(xì)胞數(shù): | 1x10^6 cells |
生物安全級別: | 2 |
組織來源: | 皮膚 |
細(xì)胞形態(tài): | 貼壁；上皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞活力: | 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion） |
細(xì)胞檢測: | 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 |
培養(yǎng)條件: | DMEM(高糖) +10% FBS+1%P/S；37℃，5% CO2 |
傳代方法:
| 建議1:2-1:3 兩天換液一次 |
凍存條件: | 90%FBS+10%DMSO |
■ 運輸
凍存細(xì)胞：干冰運輸，液氮保存（或-80℃冰箱不超過1周）
復(fù)蘇細(xì)胞：常溫運輸
T25 瓶細(xì)胞處理方法：
收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。正常請進(jìn)行以下操作：
1）75% 酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2）將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中預(yù)溫 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3）顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200× 各一張）
前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供或未拍照默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
4）貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第三步中準(zhǔn)備的 5-6ml 培養(yǎng)基。放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng) 。待細(xì)胞密度達(dá)到 80% 以上，進(jìn)行傳代。密度達(dá)到 80% 以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞：將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基離心收集，重懸計數(shù)根據(jù)密度進(jìn)行分瓶，密度在3x105/ml 為宜。
收到第一次傳代比例建議 1:2，之后可根據(jù)細(xì)胞密度和增殖情況適當(dāng)調(diào)整。
注：
培養(yǎng)瓶內(nèi)非完全培養(yǎng)基，請務(wù)必使用新鮮培養(yǎng)基。 收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題，請當(dāng)天反饋并提供圖片，且保存前三天照片以便分析。7 天內(nèi)反饋，細(xì)胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理；7 天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費售后。
凍存管收到處理方法：
收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。正常請進(jìn)行以下操作：檢查干冰揮發(fā)情況，將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至 -80 度冰箱 ( 不超過一周）或液氮保存 ,建議盡早復(fù)蘇。復(fù)蘇后有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，免費重發(fā)一管并有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)復(fù)蘇第二管。
